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SARS-COV-2 危机期间,抗体特异性和可重复性更值得

在SARS-COV-2危机期间,世界各地的医学研究人员都正在开发 SARS-COV-2 检测方法,以跟踪人群中的病毒暴露和可能的免疫力 (1,2,3)。检测策略包括采用 PCR 诊断阳性感染(通过检测存在病毒遗传物质的情况)和使用血液检测试剂盒(也称为血清学检测)。使用这些诊断工具,科学界可以更好地了解 SARS-COV-2 流行病的规模和轨迹。

 

 

 

但是,来自牛津的医学教授 John Bell 表示,包括英国和西班牙在内的国际研究界的科学家认为,许多用于评估的血清学抗体检测试剂盒“性能不佳”。贝尔进一步指出,假阴性和/或假阳性太多,导致反映病毒暴露和可能的免疫力的流行病学数据不准确(1)。美国国家科学院新发传染病常设委员会(the National Academy of Sciences’ Standing Committee on Emerging Infectious Diseases)和 21 世纪健康威胁(21st Century Health threats )成员对特定抗体血清学检测的可靠性和可获得性上表示关注 (4)。在写给白宫的信中,美国国家科学院科学家指出,“在进行严格的质控及描述其性能特征后之前",当前的抗体检测结果”应怀有可疑的态度” (4)。

 

科学界正紧锣密鼓地开发SARS-COV-2的诊断和治疗方法,所以对于抗体供应商而言,对检测试剂进行充分的特征描述和严格的验证以能够提供高度一致性、可重复的结果比以往任何时候都更为重要。Cell Signaling Technology (CST) 提供关键试剂(包括门用于 SARS-CoV-2 组合的试剂)、试剂盒和服务,以支持全世界的传染病研究人员了解病毒的行为、如何阻断病毒以及如何治愈它。CST 的研究人员积极参与科学合作,了解 SARS-CoV-2 的作用机制,提供深刻的见解,了解将在未来疫苗开发中使用的病毒的分子结构。

 

SARS-CoV-2 研究紧迫、至关重要,我们没有时间浪费在产生模棱两可结果的试剂上,更没有时间浪费在由于特异性差而失败的实验上。为确保质量、特异性和一致性,CST 遵循抗体验证标志(改编自 Uhlen, M., Bandrowski, A., Carr, S. et al. A proposal for validation of antibodies. Nat Methods 13, 823–827 (2016))。

 

每种 CST 开发的抗体均经历苛刻的相关应用的内部验证检测,这些检测会根据靶标和各个抗体的进行匹配。CST 向来是生产(我们内部生产超过 95% 的商品化产品)并在内部严格验证我们的产品。因为没有任何一个单独的测定方法可以确定验证的有效性,所以抗体验证检测可以是以下各项的组合:

1) 二元模型:分析一组阳性和阴性表达的细胞系,野生型与遗传或基于 CRISPR 的敲除

2) 范围表达:分析大量具有已知靶标表达水平(高表达与低表达因子)、siRNA 和杂合敲除的细胞系

3) 正交数据:通过基于非抗体的分析(包括质谱法)进行验证

4) 多种抗体:使用基于富集的应用(IP、ChIP、ChIP-seq)来观察不同的抗体结合相同靶标的信号强弱并进行比较,或使用免疫染色应用以来证明相同的染色分布或靶标定位

5) 异源表达:天然(或突变)靶蛋白异源表达后,在细胞系中评估

6) 补充测定:使用竞争性 ELISA、肽点印迹、蛋白质阵列来确认信号特异性或用抗原肽封闭以消除修饰特异性

 

 

 

另外,CST 提供了大量的针对此次病毒研究的重组单克隆抗体小包装套装(见下表)。这些产品可以保证批次高度一致性,且持续供应科学家。

 

 

 

病毒入侵,复制和转录

· Endosomal Marker Antibody Sampler Kit

Caveolin-1Clathrin Heavy ChainEEA1Rab5ARab7Rab11

 

· ER and Golgi-Associated Marker Proteins Antibody Sampler Kit

CalnexinERp72PDIRCAS1Syntaxin 6

 

· Organelle Localization IF Antibody Sampler Kit

AIFEEA1LAMP1PDIRCAS1

 

· Translation Initiation Complex Antibody Sampler Kit

eIF4AeIF4A1Phospho-eIF4BeIF4BPhospho-eIF4EeIF4EPhospho-eIF4GeIF4GeIF4H

 

· Vesicle Trafficking Antibody Sampler Kit

 

Phospho-Caveolin-1Caveolin-1Clathrin Heavy ChainAPPL1EEA1Syntaxin 6Rab5AGOPC

 

 

 

 

病毒检测和天然免疫激活

 

Rig-I Pathway Antibody Sampler Kit

MDA-5,Rig-I,MAVS,IRF-3,TBK1/NAK,Phospho-TBK1/NAK,Phospho-IRF-3,Phospho-IKKε,IKKε

 

Toll-like Receptor Antibody Sampler Kit

Toll-like Receptor 1,Toll-like Receptor 2,Toll-like Receptor 7,Toll-like Receptor 9

 

Toll-like Receptor Antibody Sampler Kit II

Toll-like Receptor 1,Toll-like Receptor 2,Toll-like Receptor 3,Toll-like Receptor 6,Toll-like Receptor 7,Toll-like Receptor 8,Toll-like Receptor 9

 

 

 

 

I 型干扰素和病毒限制因子

 

Jak Isoform Sampler Kit

Jak1,Jak2

 

Phospho-Jak Family Antibody Sampler Kit

Jak1,Phospho-Jak1,Jak2,Phospho-Jak2,Jak3 ,Phospho-Jak3,Tyk2,Phospho-Tyk2

 

Stat Antibody Sampler Kit II

Stat1,Stat2,Stat3,Stat4,Stat5,Stat6

 

• Phospho-Stat Antibody Sampler Kit:

Phospho-Stat1,Phospho-Stat2,Phospho-Stat3,Phospho-Stat3,Phospho-Stat5,Phospho-Stat6

 


 

细胞因子与炎症

 

· Jak/Stat Pathway Inhibitors Antibody Sampler Kit:

SOCS1, SOCS2, SOCS3, PIAS1, PIAS3, PIAS4

 

· Jak Isoform Sampler Kit

Jak1,Jak2

 

· Phospho-Jak Family Antibody Sampler Kit

Jak1,Phospho-Jak1,Jak2,Phospho-Jak2,Jak3 ,Phospho-Jak3,Tyk2,Phospho-Tyk2

 

· Stat Antibody Sampler Kit

Stat1,Stat3,Stat5,Stat6

 

· STAT Antibody Sampler Kit II

Stat1,Stat2,Stat3,Stat4,Stat5,Stat6

 

· Phospho-Stat Antibody Sampler Kit

Phospho-Stat1,Phospho-Stat2,Phospho-Stat3,Phospho-Stat3,Phospho-Stat5,Phospho-Stat6

 

 

 

 

细胞死亡与生存力

Annexin V Early Apoptosis Detection Kits

Ghost Dye™ Viability Dyes

Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (II)

Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution

Resazurin Cell Viability Kit

XTT Cell Viability Kit

 

 

 

 

 

CST 还推出了用于检测清中新型冠状病毒Spike蛋白的ELISA试剂盒 SARS-CoV-2 Spike Protein Serological IgG ELISA Kit #20154

 

 

 

总之,研究人员的实验结果和质量取决于是否使用了可以信赖的试剂。在 CST,我们有同样的愿景:协助推进SARS-COV-2 检测方法和治疗药物的研发,采取行动应对健康危机

 

 

 

 

 

参考文献:

  1. https://www.bloomberg.com/amp/news/articles/2020-04-07/new-test-hopes-dashed-as-u-k-finds-antibody-kits-don-t-deliver
  2. https://www.genomeweb.com/molecular-diagnostics/congressional-leaders-seek-coronavirus-test-information-fda#.XpiS3lNKhTY
  3. https://www.cnn.com/2020/04/14/health/antibody-test-explainer/index.html
  4. https://www.cnn.com/2020/04/14/health/coronavirus-antibody-tests-scientists/index.html

 

 

点击,了解CST最新的SARS-CoV-2研究产品。

 

 

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